Nyheder

JavaScript er i øjeblikket deaktiveret i din browser.Nogle funktioner på denne hjemmeside virker ikke, hvis JavaScript er deaktiveret.
Registrer dig med dine specifikke oplysninger og det specifikke lægemiddel af interesse, og vi vil matche de oplysninger, du giver, med artikler i vores omfattende database og sende dig en PDF-kopi med det samme.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, afdeling for infektionssygdomme, Suzhou University First Affiliated Hospital, Suzhou City, Jiangsu-provinsen, 215000 Tlf.tumorer i fordøjelsessystemet med en 5-års samlet overlevelse på 14,1%.Mange patienter med HCC er diagnosticeret på et fremskredent stadium, så tidlig screening er afgørende for at reducere dødeligheden fra HCC.Ud over almindeligt anvendte detektionsindikatorer som serum alfa-fetoprotein (AFP), linse lectin-reaktivt alfa-fetoprotein (AFP-L3) og unormalt protrombin (vitamin K-mangel-induceret protein II, PIVKA-II), væskebiopsiteknikker Det har vist sig at være af diagnostisk værdi ved påvisning af HCC.Sammenlignet med invasive procedurer kan væskebiopsi påvise cirkulerende maligne metabolitter.Væskebiopsiteknikker detekterer cirkulerende tumorceller, cirkulerende tumor-DNA, cirkulerende RNA og exosomer og bruges til tidlig screening, diagnose og prognostisk evaluering af HCC.Denne artikel gennemgår molekylærbiologien og anvendelsen af ​​forskellige væskebiopsiteknikker til at isolere lovende biomarkører, der kan være levedygtige muligheder for tidlig vurdering af HCC for at forbedre tidlig screening af højrisiko-HCC-grupper.Nøgleord: væskebiopsiteknik, hepatocellulært karcinom, højrisikogruppe.
Hepatocellulært karcinom (HCC) er en almindelig malign tumor i fordøjelseskanalen, der er nummer sjette blandt nye tilfælde af maligne tumorer hos både mænd og kvinder.1 På verdensplan er leverkræft den tredje hyppigste årsag til kræftdød efter lunge- og tyktarmskræft, der tegner sig for 8,3 % af kræftrelaterede dødsfald fra alle maligne neoplasmer.1 Prognosen for HCC er tæt relateret til stadiet ved diagnosen.Hovedårsagerne til dårlig overlevelse i HCC er intrahepatiske metastaser, portalvenøse tumortromber og fjernmetastaser, der udelukker resektion, og mange af disse karakteristika er allerede til stede hos patienter på diagnosetidspunktet.
Baseret på retningslinjer for diagnostik og behandling er de vigtigste risikofaktorer for udvikling af HCC levercirrhose, kronisk hepatitis B-virus (HBV) eller hepatitis C-virus (HCV) infektion, alkoholisk fedtleversygdom og ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) ).2 Derudover inkluderer risikofaktorer for HCC aflatoksin-kontamineret fødeindtagelse, schistosomiasis, andre årsager til cirrose, en familiehistorie med leverkræft, diabetes, fedme, rygning og lægemiddelinduceret leverskade.35- og 45-årige højrisikogrupper bør have regelmæssige lægetjek.Tidlig screening er en vigtig tidlig behandlingsstrategi for at forbedre den samlede overlevelse for patienter med HCC.
Biomarkører som AFP, AFP-L3 og PIVKA-II anbefales til tidlig screening af HCC3,4.Flydende biopsiteknikker har vist lovende resultater i tidlig diagnose og behandlingsevaluering.5,6 Der er gjort betydelige fremskridt inden for HCC-væskebiopsi, som kan have højere sensitivitet og specificitet end almindeligt anvendte serummarkører såsom AFP (tabel 1).
AFP er en udbredt biomarkør i HCC og er i øjeblikket den mest detaljerede biomarkør, der er meget udbredt til tidlig screening, diagnose og evaluering af sygdommen.Et vedvarende forhøjet AFP-niveau betragtes som en risikofaktor for progression af HCC.7,8 Detektionshastigheden af ​​små hepatocellulært karcinom (sHCC) er stigende med udviklingen af ​​ultralyd og computertomografi, og AFP har vist sig at være særligt ufølsom over for påvisning af hHCC i klinisk praksis.Ifølge en retrospektiv multicenterundersøgelse9 blev AFP-positiv fundet i 46 % (616/1338) af HCC-tilfældene og 23,4 % (150/641) af sHCC-tilfældene.Derudover er AFP-niveauer forhøjede hos patienter med kronisk leversygdom og cirrhose.10 AFP har således en begrænset screeningseffekt for sHCC.11 Ifølge Asia-Pacific Clinical Practice Guidelines for hepatocellulært karcinom anbefales brug af AFP ikke.12 Klinisk evidens tyder på, at PIVKA-II er overlegen i forhold til AFP i behandlingen af ​​HCC, og at kombinationen af ​​PIVKA-II og AFP har en højere diagnostisk værdi i HCC.13 Sammenlignet med vævsbiopsi detekterer væskebiopsi primært tumorassocierede metabolitter i kropsvæsker (blod, spyt, pleuravæske, cerebrospinalvæske eller urin) og er mindre invasiv for væv.14 Derudover kan flydende biopsier afspejle maligne træk, der ikke er til stede i primært tumorvæv.15 Flydende biopsier bliver endnu ikke testet i klinisk praksis for alle typer tumorer, men deres diagnostiske potentiale i cancer tiltrækker onkologer opmærksomhed.16 Væskebiopsi kan påvise cirkulerende tumorceller (CTC'er), cirkulerende tumor-DNA (cDNA), cirkulerende frit RNA (ecRNA) og exosomer.I denne artikel vil vi diskutere karakteristika, rolle og anvendelse af forskellige væskebiopsiteknikker i tidlig screening af højrisiko-HCC-grupper.
Ekstracellulært DNA (cfDNA) i blodprøver fra raske individer blev først beskrevet i 1948 af Mandel et al.17 cfDNA er et cellefrit DNA-fragment med en længde på ca. 160-180 bp, der primært stammer fra lymfocytter og myeloidceller.ctDNA er et specifikt mutant DNA-fragment frigivet af tumorceller til det perifere blod, som repræsenterer den genomiske information fra tumorceller efter visse patofysiologiske processer, herunder nekrose, apoptose og udskillelse.Andelen af ​​ctDNA i totalt cfDNA varierer meget med tumortype, og cDNA-fragmenter rapporteres typisk at være mindre end 167 bp lange.18 Underhills undersøgelse viste, at cfDNA-fragmenter generelt er kortere end normalt cfDNA.19 Sammenlignet med raske individer er den samlede længde af cfDNA-fragmenter i blodet hos cancerpatienter kortere, så cfDNA kan bruges som en indikator for tidlig tumorscreening.Berigelse af visse undersæt af cfDNA-fragmentlængder kan forbedre påvisningen af ​​cDNA forbundet med ikke-metastatiske solide tumorer.Undersøgelser har vist, at ctDNA findes i over 75 % af fremskreden kræft i bugspytkirtel, tyktarm, blære, mave-tarm, lever, æggestokke, brystkræft, melanom og hoved- og halskræft.20,21 Mængden af ​​ctDNA i blodet afhænger dog af tumorens placering.22 I en undersøgelse foretaget af Bettegoud viste det sig, at patienter med kolorektal-, bryst-, lever-, lunge- og prostatacancer havde højere niveauer af cDNA i blodet end andre kræftformer.I modsætning hertil var cDNA-koncentrationen i blodet lavere hos patienter med oral cancer, bugspytkirtelkræft, mavekræft og gliom.enogtyve
Fordi ctDNA indeholder de samme genetiske mutationer som primære tumorceller, kan cDNA bruges til at detektere heterogene tumorspecifikke mutationer og epigenetiske ændringer, herunder methylering, hydroxymethylering, enkeltnukleotidvariationer og kopiantal variationer.treogtyve
DNA-methylering er en af ​​de mest almindelige epigenetiske ændringer, der resulterer i genundertrykkelse.Sammenlignet med normale celler er der forskelle i det overordnede niveau af methylering af tumorcellegenomet, især i methyleringen af ​​tumorsuppressorgener, som kan påvises på et tidligt stadium, hvilket tyder på, at ændringer i DNA-methylering kan være en indikator for tidligt påvisning af tumorigenese.Tumorsuppressorgener forbundet med HCC kan inaktiveres ved promotormethylering, hvorved tumorgenese stimuleres.24 DNA-methylering er en ideel markør til tidlig diagnosticering af tumorer på grund af dens vævsspecificitet, sporbarhed og aldersuafhængighed.Derudover er DNA-methylering mere almindelig sammenlignet med somatiske mutationer, fordi der er flere målregioner og flere ændrede CpG-steder i hver region af målgenomet.25 Ud over flere CpG-steder er et stort antal uafhængige hypermethylerede loci i ctDNA blevet identificeret i DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 og RGS10.26 Xu et al.Sammenligning af cfDNA-prøver fra 1098 HCC-patienter og 835 raske kontroller, og gener forbundet med HCC viste sig at korrelere stærkt med de tilsvarende plasma-cDNA-methyleringssignaturer.25 Baseret på laboratorieanalyse blev der udviklet en prædiktiv model indeholdende 10 methyleringsmarkører med sensitivitet og specificitet på henholdsvis 85,7 % og 94,3 %, og disse markører var stærkt korrelerede med tumormasse, tumorstadie og respons på behandling.Disse resultater indikerer, at brugen af ​​cDNA-methyleringsmarkører lover meget i diagnosticering, overvågning og prognose af HCC.I en methyleringsmodel bestående af tre afvigende methylerede gener (APC, COX2, RASSF1A) og et miRNA (miR203) præsenteret af Lu et al27, var sensitiviteten og specificiteten af ​​model 27 til diagnosticering af HBV-associeret HCC sammenlignelig.80 %.Derudover kunne modellen påvise 75 % af udiagnosticerede HCC-patienter med et AFP-niveau på 20 ng/ml.Genet for det Ras-associerede domænefamilie 1A-protein (RASSF1A) er den vigtigste gentagne DNA-sekvens i det humane genom.Araujo et al.konkluderede, at hypermethylering af RASSF1A-promotoren kunne være en værdifuld biomarkør til tidlig screening af HCC og et potentielt molekylært mål for epigenetisk terapi.28 I en undersøgelse blev serum RASSF1A-promotorhypermethylering fundet hos 73,3 % af patienterne med HCC.29 Langt indskudt nukleotidelement 1 (LINE-1) er en anden meget aktiv retrotranspositionsmediator.Hypomethylering af LINE-1 blev fundet i DNA'et af 66,7% af HCC serumprøver og var forbundet med tidligt tilbagefald og dårlig overlevelse efter radikal resektion.29 Hypermethylering er en almindelig genetisk proces, der spiller en unik rolle i udviklingen af ​​levercirrhose og HCC.30 I modsætning hertil er hydroxymethylering en demethyleringsproces, der inducerer genreaktivering og -ekspression, og påvisningen af ​​5-hydroxymethylcytosin (5-hmC)-produktet i denne proces kan bruges til at identificere en tumor.Methylering og hydroxymethylering af cDNA er forbundet med tumorigenese og kan bidrage til den tidlige screening af HCC.I en undersøgelse af 2554 forsøgspersoner blev 31 genomomfattende 5-hmC'er fundet i cfDNA-prøver, og 32 gener blev identificeret ved at sammenligne 5-hmC-sekvenser i HCC-patienter og højrisikogrupper såsom dem med kroniske sygdomme.Diagnostiske modeller af leversygdomme.og skrumpelever.Denne model var overlegen i forhold til AFP med hensyn til at skelne HCC fra ikke-tumorvæv.
Mutationer i kodende regioner kan føre til transkriptionelle abnormiteter, som kan føre til ændringer i proteinsekvenser og i sidste ende kræft.Enkeltnukleotidvarianter er vigtige genomiske markører for tidlig tumorscreening på grund af deres høje vævspålidelighed og høje tumor- og vævsspecificitet.Talrige HCC-relaterede undersøgelser, der anvender næste generations sekventering (NGS) til exom- og helgenom-sekventering af cancer har identificeret almindelige muterede cellulære gener såsom TP53 og CTNNB1, såvel som flere, herunder ARID1A, MLL, IRF2.De nye gener, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 og JAK1 viser moderate mutationsrater. Mutant genfunktionsanalyse tyder på, at ændringer i kromatin-remodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT signaltransduktion, P53-cellecyklusvejen, epigenetiske modifikatorer, oxidative stressveje, PI3K/AKT/MTOR-vejen og RAS/RAF/ MAPK kinase pathway spiller afgørende roller i HCC onkogenese.32,33 I en undersøgelse, hvor tumorassocierede mutationer blev påvist, fandt Huang et al, at hyppigheden af ​​tumorassocierede mutationer afhængig af ctDNA var 19,5%, og specificiteten var 90%. .34 Derudover var patienter, der oplevede vaskulær invasion, mere tilbøjelige til at have ctDNA-mutationer (P=0,041) og kortere tilbagefaldsfri overlevelse (P<0,001). Mutant genfunktionsanalyse tyder på, at ændringer i kromatin-remodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT signaltransduktion, P53-cellecyklusvejen, epigenetiske modifikatorer, oxidative stressveje, PI3K/AKT/MTOR-vejen og RAS/RAF/ MAPK kinase pathway spiller afgørende roller i HCC onkogenese.32,33 I en undersøgelse, hvor tumorassocierede mutationer blev påvist, fandt Huang et al, at hyppigheden af ​​tumorassocierede mutationer afhængig af ctDNA var 19,5%, og specificiteten var 90%. .34 Derudover var patienter, der oplevede vaskulær invasion, mere tilbøjelige til at have ctDNA-mutationer (P=0,041) og kortere tilbagefaldsfri overlevelse (P<0,001).Mutant genfunktionsanalyse tyder på, at ændringer i kromatin-remodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT-signalering, P53-cellecyklusvej, epigenetiske modifikatorer, oxidative stress-veje, PI3K/AKT/MTOR-veje og RAS/RAF/MAPK-kinase-veje spiller en kritisk rolle i HCC tumorigenese.32,33 I en undersøgelse, der fandt tumorassocierede mutationer, viste Huang et al.fandt, at hyppigheden af ​​ctDNA-afhængige tumorassocierede mutationer var 19,5 %, og specificiteten var 90 %..34 кроме того, пациентов с с с с с с с с с с с и и и и и и и и и и и и и и и и с с с с с с с с с с с с с .34 Derudover havde patienter med vaskulær invasion flere cDNA-mutationer (P=0,041) og en kortere sygdomsfri overlevelse (P<0,001).Funktionel analyse af de mutante gener afslørede kromatin-remodellering, Wnt/β-catenin og JAK/STAT-signalering, P53-cellecyklusvejen, epigenetiske modifikatorer, den oxidative stress-vej, PI3K/AKT/MTOR-vejen og RAS/RAF/MAPK kinasevej spiller en kritisk rolle i onkogenese af HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 I en undersøgelse, der fandt tumor-associerede mutationer, Huang et al.fandt, at tumorassocierede mutationer var 19,5 % afhængige af cDNA med en specificitet på 90 % 34. Derudover var patienter, der havde gennemgået vaskulær invasion, mere tilbøjelige til at udvikle cDNA.мутация (P = 0,041) og более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutation (P=0,041) og kortere sygdomsfri overlevelse (P<0,001).Et andet almindeligt HCC-drivergen er TP53, som har en mutationsrate på over 30 %.Undersøgelser har vist, at hyppigheden af ​​TP53-mutationer i ctDNA i blod og urin varierer fra 5 % til 60 %.35 Johans undersøgelse viste, at ctDNA-mutationsspektret i sen HCC har en lignende mutationsrate som tidlig HCC, herunder TERT-promotoren (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutationer i AXIN1., ARID2, KMT2D og TSC2 (6 % hver).36 β-catenin (CTNNB1) onkogenet spiller en vigtig rolle i Wnt-signalvejen.Transkriptionskoaktivatoren CTNNB1 kan fremme genekspression, hvilket kan føre til celleproliferation, hæmning af apoptose og angiogenese.CTNNB1 kan også interagere med TERT for at inducere hepatocyttransformation.33 TERT-promotoren er hyppigt muteret i nogle solide tumorer.Ændringer i TERT, en af ​​de tidligste genetiske ændringer i malign transformation af HCC, kan føre til telomerasereaktivering i cirrhotiske hepatocytter og kan fremme spredning og forhindre aldring.Mutationer i 33-37 TERT-promotoren er blevet rapporteret at forekomme hos 59-90% af patienterne med proliferative leverknuder og tidlig HCC og er forbundet med overlevelse.38
Kopinummerændringer (CNA) er en vigtig undertype af somatiske mutationer.Forskning har vist, at den udbredte og fokale byrde af CNA er en genomisk signatur, der er i stand til at forudsige tumorimmuninfiltration og -udelukkelse i nogle typer kræft.39 Aktiv infiltrationssignalering, høj cytolytisk aktivitet, alvorlig inflammation og genetiske markører forbundet med antigenpræsentation i HCC.Analyse af dataarrayet af enkeltnukleotidpolymorfismer i 477 forsøgspersoner afslørede en lav byrde på CNS.I modsætning hertil viste kromosomalt ustabile tumorer med en høj omfattende CNA-belastning tegn på immunafstødning og var forbundet med proliferation, DNA-reparation og TP53-dysfunktion.Xu et al.viste, at HCC-gruppen havde højere CNA-score end den kroniske leversygdomsgruppe.40 Ved brug af hel-genom-sekventering af en enkelt celle viste det sig, at CNA'er optræder tidligt i hepatokarcinogenese og forbliver relativt stabile under tumorprogression.41 Chung et al.fandt, at cfDNA-niveauer var signifikant forhøjede i HCC-patienter, og at genom-brede CNA'er i cfDNA var en vigtig uafhængig prognostisk markør i HCC-patienter behandlet med sorafenib.42 Patienter med en højere CNA-byrde var mere tilbøjelige til at have sygdomsprogression og død end dem med en lavere CNA-byrde.Ollerich et al.fandt ud af, at kopiantal ustabilitetsindeks (CNI) kan bruges til at vurdere CNA i cfDNA fra cancerpatienter.De bemærkede, at patienter med fremskreden cancer havde signifikant højere CNI-score end en kontrolgruppe, som vurderer patientrespons på systemisk kemoterapi og immunterapi.43 Disse resultater tyder på, at CNA'er fundet i flydende biopsiprøver kan tjene som prognostiske indikatorer hos patienter med fremskreden cancer.HCC på baggrund af systemisk terapi.
I øjeblikket kan metoderne, der bruges til at påvise ctDNA, opdeles i målrettede og ikke-målrettede metoder.Kort fortalt er målrettede metoder såsom digital polymerasekædereaktion (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq og Tam-Seq meget følsomme over for foruddefinerede gener.Off-target metoder såsom hele genomsekventering og NGS giver et omfattende overblik over hele det genomiske landskab.44 Sammenlignet med målpaneler kan helgenomsekventering ikke kun detektere punktmutationer og -insertioner, men også omarrangementer og kopiantalvariationer.prognose, og CTC og cfDNA er gode indikatorer, der kan bruges til dynamisk overvågning af HCC.45 Derudover kan cfDNA-analyse være mere nyttig til påvisning af HCC.Yan et al.viste, at cfDNA i plasma hos patienter med HCC var signifikant højere end hos patienter med leverfibrose og raske kontroller.Sammenlignet med AFP forventes ctDNA at være en bedre screeningsmarkør for tidlig HCC.46 I et prospektivt studie af 47 flydende biopsier, der testede cfDNA og protein i en populationspopulation, blev de vist at være effektive til at differentiere patienter med HCC fra patienter uden HCC.I en opfølgning af 331 ultralydsnormale og AFP-negative patienter var sensitiviteten og specificiteten af ​​cfDNA til diagnosticering af HCC henholdsvis 100 % og 94 %, så cDNA kunne påvise HCC hos asymptomatiske HBsAg seropositive individer.I Yeo48-studiet blev der fundet en høj frekvens (92,5%) af hypermethylering af RASSF1A-promotoren hos patienter med HCC.Derudover har Xu et al.skabt en diagnostisk model til at forudsige HCC ved hjælp af et panel af specifikke methyleringsmarkører med en specificitet og sensitivitet på henholdsvis 90,5 % og 83,3 %.Panelet gør det muligt at skelne patienter med HCC fra patienter med andre leversygdomme, hvilket er bedre end AFP.De fandt også, at normale kontroller, der testede positive, kan have risikofaktorer for HCC, såsom HBV-infektion eller en historie med alkoholbrug.25 Vi antager, at højrisikofaktorer for HCC kan fremme hypermethylering af cfDNA, som derefter bidrager til progressionen af ​​HCC, og dermed kan cfDNA spille en nøglerolle i screening for højrisikogrupper.Cai et al.opsummere hele spektret af ctDNA-mutationer og tilbyde en robust strategi til vurdering af tumorbyrde hos patienter.49 Denne strategi kan identificere tumorgenese en median på 4,6 måneder før billeddannelsesændring og har vist overlegen diagnostisk ydeevne sammenlignet med serumbiomarkørerne AFP, AFP-L3 og PIVKA-II.Den diagnostiske værdi af cDNA-test er blevet påvist, når billedevaluering ikke er tilgængelig, så cDNA-test er af værdi ved diagnosticering af tidlig HCC i højrisikogrupper.For nylig brugte forskere NGS-teknologi til at analysere indikatorer for multivariat genetisk variation (herunder 5-hydroxymethylcytosin, 5'-motiv, fragmentering, nukleosomspor, HIFI) i 3204 kliniske prøver og cfDNA.50 revaliderede HIFI-modeller med tre uafhængige tog-, test- og testsæt viste stabil og pålidelig diskrimination mellem HCC- og ikke-HCC-populationer med henholdsvis 95,79 % og 95,42 % følsomhed i HCC-specifikke test- og testsæt.Kønnene var henholdsvis 95,00 % og 97,83 %.Den diagnostiske værdi af HIFI-metoden er højere end AFP til at skelne mellem HCC og cirrhose.Derudover bruges ctDNA også i kirurgisk behandling.Atsushi et al.bestemte de præoperative serumniveauer af ctDNA hos patienter med HCC og fandt, at recidivhyppigheden og den ekstrahepatiske metastasehastighed i den cDNA-positive gruppe var signifikant højere end i den cDNA-negative gruppe, og cDNA-niveauerne var signifikant korrelerede.med tumorprogression.51 Da ctDNA er en meget følsom biomarkør, kan den forudsige HCC's evne til at invadere kar.Wang et al.udførte helgenomsekventering af 46 patienter med HCC, og multivariat analyse viste, at tærskelværdien for allelfrekvensen af ​​cDNA-varianten for invasion i mikrokar er 0,83 %, sensitivitet 89,7 % og specificitet 80,0 %.en uafhængig risikofaktor for mikrovaskulær invasion i resektabel HCC, hvilket tyder på, at cDNA kan hjælpe med at guide optimal behandling.Som konklusion er ctDNA fuldt impliceret i forekomsten og udviklingen af ​​HCC og kan bruges til tidlig screening, kirurgisk evaluering og sygdomsovervågning.
CTC'er er ondartede celler afledt af primære tumorer eller metastaser, der metastaserer til blodbanen.Tumorceller udskiller matrix metalloproteinaser (MMP'er), som nedbryder basalmembranen, hvilket tillader tumorceller at komme direkte ind i blodet og lymfekarrene.De fleste CTC'er elimineres dog hurtigt af anoikis, immunangreb eller shear stress.53 Den epitheliale-mesenchymale overgang (EMT) gør det muligt for CTC'er let at blive isoleret fra det primære tumorvæv, invadere kapillærer og opnå signifikant forbedret overlevelse, metastase, invasivitet og lægemiddelresistens.Undersøgelser har vist, at der er dyb heterogenitet mellem de forskellige tumorceller i primære metastatiske tumorer.Således kan CTC-analyse føre til en omfattende forståelse af tumorcelle heterogenitet.54
Specifikke markører for HCC-associerede CTC'er inkluderer glypican-3 (GPC3), asialoglycoproteinreceptor (ASGPR), epitelcelleadhæsionsmolekyle (EpCAM) og stamcelleassocierede markører såsom CD44, CD90, 55 og intercellulært adhæsionsmolekyle 1 (ICAM1).) .56 GPC3-markøren er et cellemembranforankret protein, der klinisk anvendes til patologisk analyse og karakterisering af HCC.57 Ekspression af GPC3 er mere almindelig i HCC-tumorceller med mellemliggende og lav differentiering og fremmer ekstrahepatisk migration;desuden indikerer tilstedeværelsen af ​​GPC3+ CTC'er metastatisk HCC.58 ASGPR er et transmembranprotein, der kun udtrykkes på overfladen af ​​hepatocytter og er stærkt udtrykt i veldifferentieret HCC.EpCAM er et af de mest almindeligt anvendte membranassocierede proteiner til at fange CTC'er.EpCAM er blevet identificeret som en overflademarkør for HCC-celler med stamcellekarakteristika59, som korrelerer med forskellige klinisk-patologiske træk ved HCC, såsom vaskulær invasion, vurderede AFP-niveauer og fremskreden stadium af leverkræft på Barcelona Hospital (BCLC).60 CTC EMT-fænotypen er meget metastatisk.54 EMT-processer i CTC fremmer HCC-metastaser.Ekspression af EMT-markører såsom vimentin, twist, E-box zink finger binding (ZEB) 1, ZEB2, snail, slug og E-cadherin er blevet undersøgt i leverafledte CTC'er fra HCC-patienter.58 CanPatrol™-systemet udviklet af Cheng [61] klassificerede CTC'er i tre fænotypiske undergrupper baseret på overvejende udtrykte markører: epithelial fænotype (EpCAM, CK8/18/19), mesenkymal fænotype (vimentin, coiled) og blandet fænotype.Hos 176 patienter var total CTC overlegen i forhold til AFP med hensyn til at differentiere HCC fra benign leversygdom.AUC-værdierne for total CTC, AFP og kombineret total CTC og AFP var 0,774 (95% CI, 0,704-0,834), 0,669 (95% CI, 0,587-0,750) og 0,821 (95% CI, 0,756-0,856-0,856 ).), henholdsvis.CTC-klassificering baseret på EMT kan forudsige HCC-diagnose, tidligt tilbagefald, metastaser og kortere samlet tid.
I øjeblikket omfatter metoder til påvisning af CSC'er fysiske metoder og biologiske metoder.Fysiske metoder, ofte omtalt som berigelse baseret på biofysiske egenskaber, afhænger hovedsageligt af CSC'ens fysiske egenskaber, såsom størrelse, tæthed, ladning, mobilitet og deformerbarhed.Afhængig af de fysiske egenskaber findes der forskellige metoder såsom filtreringsbaserede systemer, dielektroforese osv. Sidstnævnte, også kendt som immunaffinitetsbaseret berigelse, er hovedsageligt baseret på antigen-antistofbinding, da metoden anvender antistoffer mod tumorspecifikke biomarkører såsom EpCAM, ASGPR, human epidermal vækstfaktor receptor 2 (HER2), prostataspecifikt antigen (PSA), human pancytokeratin (P-CK) og carbamoylphosphatsyntase 1 (CPS1).62 En anden type, kaldet no-berigelsesmetoden, bruger flowcytometri til at differentiere CTC'er fra leukocytter baseret på et højere nuklear-til-cytoplasmatisk forhold og størrelse.I øjeblikket er den eneste FDA-godkendte test til påvisning af CTC'er Cell-Search™-systemet, som bruger EpCAM-celleoverflademarkøren. Kombineret markørbaseret CTC-detektion kunne dog øge positivitetsraten.54 En blanding af antistoffer mod ASGPR og CPS1 opnåede en CTC-detektionsrate på 91% hos HCC-patienter.63 Zhang et al. brugte en CTC-Chip med antistoffer mod ASGPR, P -CK og CPS1 og differentierede HCC-patienter fra dem med godartet leversygdom eller non-HCC-kræft med en hastighed på 100%.64 En undersøgelse foretaget af Wang påviste EpCAM+ CTC'er hos 60% af 42 HCC-patienter og fandt signifikante sammenhænge mellem både positiviteten rate og antallet af CTC'er med TNM-stadiet.65 Guo et al fandt, at en CTC-afledt PCR-score var forhøjet hos 125/171 (73%) patienter, hvis AFP-niveau var <20 ng/ml med en følsomhed på 72,5% og en specificitet på 95,0 % sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved en cutoff på 20 ng/ml.66 Kombinationen af ​​AFP og CTC'er kan forbedre HCC-detektion.45 Det menes, at CTC'er har en fordel i forhold til AFP ved tidlig screening af grupper med høj risiko for HCC. Kombineret markørbaseret CTC-detektion kunne dog øge positivitetsraten.54 En blanding af antistoffer mod ASGPR og CPS1 opnåede en CTC-detektionsrate på 91% hos HCC-patienter.63 Zhang et al. brugte en CTC-Chip med antistoffer mod ASGPR, P -CK og CPS1 og differentierede HCC-patienter fra dem med godartet leversygdom eller non-HCC-kræft med en hastighed på 100%.64 En undersøgelse foretaget af Wang påviste EpCAM+ CTC'er hos 60% af 42 HCC-patienter og fandt signifikante sammenhænge mellem både positiviteten rate og antallet af CTC'er med TNM-stadiet.65 Guo et al fandt, at en CTC-afledt PCR-score var forhøjet hos 125/171 (73%) patienter, hvis AFP-niveau var <20 ng/ml med en følsomhed på 72,5% og en specificitet på 95,0 % sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved en cutoff på 20 ng/ml.66 Kombinationen af ​​AFP og CTC'er kan forbedre HCC-detektion.45 Det menes, at CTC'er har en fordel i forhold til AFP ved tidlig screening af grupper høj risiko for HCC.Markørbaseret kombineret påvisning af CTC'er kan dog øge procentdelen af ​​positive resultater.54 En blanding af anti-ASGPR- og CPS1-antistoffer opnåede en CTC-detektionsrate på 91 % hos patienter med HCC.63 Zhang et al.brugte en CTC-Chip med antistoffer mod ASGPR, P-CK og CPS1, og skelnede også patienter med HCC fra dem med godartet leversygdom eller ikke-HCC med en hastighed på 100 %.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. hyppighed og antal af CTC'er med TNM-stadiet.65 Guo et al fandt, at PCR'en afledt af CTC'er var forhøjet hos 125/171 (73%) patienter, som havde AFP-niveauer <20 ng/mL med en sensitivitet på 72,5% og en specificitet på 95,0 % sammenlignet med 57,0 % og 90,0 % for AFP ved et cut-off niveau på 20 ng/ml.66 Kombinationen af ​​AFP og CTC'er kan forbedre påvisningen af ​​HCC.45 CTC'er anses for at have en fordel i forhold til AFP ved tidlig screening grupper.med høj risiko for HCC.Markør-baseret kombineret påvisning af CTC'er kan dog øge procentdelen af ​​positive resultater.54 En blanding af anti-ASGPR- og CPS1-antistoffer opnåede en CTC-detektionsrate på 91 % hos patienter med HCC.63 Zhang et al.brugte CTC-chips med antistoffer mod ASGPR, P-CK og CPS1 og skelnede patienter med HCC fra benign leversygdom og non-HCC med 100 %.64 Wangs undersøgelse identificerede 60 % af EpCAM+ CTC'er i 42 HCC-patienter og fandt en signifikant sammenhæng mellem forekomst og antal CTC'er på TNM-stadiet. 65 GUO 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 ， ， 敏感性 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 AFP 在 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， ctc 衍生 pcr 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20 ng/ml 时 的 特异性 为 57,0% 和 90,0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/ml. fandt, at hos 125/171 (73%) patienter med AFP-niveauer <20 ng/mL, var CTC-afledte PCR-værdier forhøjet med en sensitivitet på 72,5% og en specificitet på 95,0%, mens AFP var ved cut-off specificitet var 20 ng/ml.ml var 57,0% og 90,0%.66 Kombinationen af ​​ORP og CTC forbedrer påvisningen af ​​HCC.45 CTC'er menes at være overlegne i forhold til AFP i tidlig screening af højrisiko HCC-populationer.For CTC-positive og højrisiko HCC-grupper bør CTC-testning derfor rutinemæssigt kombineres med ultralyd og AFP-detektion.CTC'er anses dog for at være vigtige forudsigere for tumormetastaser og recidiv, og påvisning af CTC'er anbefales ikke uafhængigt som et diagnostisk værktøj.62 Derfor kan CTC fungere som en bedre prædiktiv biomarkør end andre aktuelt anvendte markører. Zhou et al fandt, at patienter med forhøjet antal EpCAM+ CTC'er og regulatoriske T-celler udviste en højere risiko for at udvikle HCC-tilbagefald end dem med lavt antal CTC'er, med et gentagelsesforhold på 66,7 % vs. 10,3 % (P < 0,001).67 En lignende undersøgelse blev rapporteret af Zhong et al.68 Derudover fandt Qi, at 101 ud af 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive dem med tidlig sygdom, var positive for CTC'er, og at meget små HCC-knuder blev påvist efter 3 til 5 måneders opfølgning. Zhou et al fandt ud af, at patienter med forhøjet antal EpCAM+ CTC'er og regulatoriske T-celler udviste en højere risiko for at udvikle HCC-tilbagefald end dem med lavt antal CTC'er, med et recidivforhold på 66,7 % vs. 10,3 % (P < 0,001).67 A lignende undersøgelse blev rapporteret af Zhong et al.68 Derudover fandt Qi, at 101 ud af 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive dem med tidlig sygdom, var positive for CTC'er, og at meget små HCC-knuder blev påvist efter 3. 5 måneders opfølgning. Чжоу и др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al fandt, at patienter med forhøjede EpCAM+ CTC'er og regulatoriske T-celler havde en højere risiko for HCC-tilbagefald end dem med lave CTC'er, med en gentagelsesrate på 66,7 % vs. 10,3 % (P<0,001 )67.En lignende undersøgelse blev udført af Zhong et al.68. Derudover fandt Qi, at 101 ud af 112 patienter (90,81%) med HCC, inklusive dem med tidlig sygdom, havde CTC'er, og at meget små HCC-knuder blev påvist efter 3 til 5 måneders opfølgning. Zhou 等人发现，与CTC 数量较少的患者相比，EpCAM+ CTC 和调节性T 细胞数量升高的患者发生HCC 复发的风险更高，复发率分别为66.7% 和10.3% (P < 0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)………..…….. Чжоу и др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.fandt, at patienter med forhøjede EpCAM+ CTC'er og regulatoriske T-celler havde en højere risiko for HCC-tilbagefald sammenlignet med patienter med færre CTC'er, med tilbagefaldsrater på henholdsvis 66,7 % og 10,3 % (P < 0,001).En lignende undersøgelse blev rapporteret af Zhong et al.68 Derudover fandt Qi, at 101 ud af 112 HCC-patienter (90,81%), inklusive patienter med tidlig sygdom, havde positive CTC-resultater og fandt meget små HCC-knuder efter 3 besøg.Observation op til 5 måneder.De fandt også CTC'er hos 12 patienter med kronisk HBV-infektion og fandt små HCC-tumorer inden for 5 måneder hos 2 CTC-positive patienter.69 Således kan CTC'er bruges til at forudsige HCC, 70 men de kan bruges mere rutinemæssigt som prædiktive biomarkører.
Ligesom cfDNA frigives cfRNA til blodbanen gennem forskellige systemer.Disse molekyler i det perifere blod repræsenterer oprindelseskræftvævet.Sammenlignet med markører påvist ved ikke-invasive metoder er cfRNA'er mere dynamisk regulerede, vævsspecifikke og rigelige i det ekstracellulære miljø.Betydningen og den diagnostiske værdi af 71 miRNA'er (miRNA'er) i HCC er blevet rapporteret i mange undersøgelser.miRNA'er er endogene ikke-kodende RNA'er (ncRNA'er), der regulerer forskellige molekylærbiologiske aktiviteter ved at hæmme translationen af ​​målbudbringer-RNA'er (mRNA'er).miRNA'er er placeret i apoptotiske legemer indkapslet i exosomer, men de kan også stabilt binde til serumproteiner og lipider i perifert blod og kan bruges til at evaluere HCC.mikroRNA'er er involveret i leverregenerering, lipidmetabolisme, apoptose, inflammation og udvikling af HCC.72 Onkogene miRNA'er såsom miR-21, miR-155 og miR-221 er velkendte i HCC.Især miR-21 spiller en nøglerolle i kollagensyntese i den ekstracellulære matrix og fibrose og fremmer hepatocarcinogenese ved at aktivere hæmatopoietiske stamceller.72,73 Tumorsuppressor miRNA'er i HCC inkluderer miRNA-122, miRNA-29, Let-7-familien og miRNA-15-familien.Let-7-familien består af mange tumorsuppressor-miRNA'er, der er målrettet mod RAS-familien.miR-15-familien inkluderer miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 og miR-497, som har komplementære sekvenser for visse mRNA'er.Derudover er lange ikke-kodende RNA'er (lncRNA'er) og cirkulære RNA'er (cirRNA'er) også vigtige for tidlig screening af HCC.lncRNA'er repræsenterer den bredeste klasse af ncRNA'er, herunder mRNA-lignende ncRNA'er, og er involveret i patogenesen af ​​mange menneskelige sygdomme.LncRNA'er spiller en regulerende rolle i leverens mikromiljø og kronisk leversygdom.74 CircRNA'er er også en klasse af ncRNA'er med flere funktioner i reguleringen af ​​genekspression.For nylig er circRNA'er blevet betragtet som diagnostiske værktøjer til HCC.
Cirkulerende frit RNA har bemærkelsesværdig stabilitet, herunder modstandsdygtighed over for temperatur, pH og RNase, hvilket gør isoleringen af ​​fnRNA fra perifert blod mindre kedelig ved brug af standard RNA-oprensningsmetoder.De mest almindeligt anvendte metoder omfatter NGS, microarray og RT-qPCR.NGS gør det muligt at måle mikroRNA'er i hele genomet.Denne metode er dog dyr, og analysen er ikke standardiseret.I modsætning hertil er RT-qPCR billig, forstærker hurtigt nukleinsyrer og tilbyder mange fordele såsom højere følsomhed, højere nøjagtighed, bredere dynamisk område og kræver færre prøver.Mikroarrays er en anden metode, der bruges til miRNA-detektion baseret på følsom og specifik hybridisering af mål-miRNA'er med komplementære DNA-prober, 75 men analyse af mikroarray-data er tidskrævende.
Cirkulerende miR-122 og Let-7 er blevet rapporteret at være potentielt nyttige til diagnosticering af tidligt stadium HCC i højrisikogrupper, markører hos patienter med HBV-associerede præmaligne knuder og tidligt stadium HCC.76 Cai et al.fandt ud af, at medlemmer af Let-7-familien (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 og miR-199a/b) er i risiko for kroniske HCC hos patienter med hepatitis.Let-7-familien kan tjene som en effektiv surrogatbiomarkør til at forudsige udviklingen af ​​HCC i højrisikogrupper forbundet med kronisk hepatitis C. 77 miR-122 har høj diagnostisk nøjagtighed til at påvise tidlig HCC hos patienter med levercirrhose.78 Serumcirkulerende MiR-107 er også blevet evalueret i de tidlige stadier af HCC, 79 og har vist et godt potentiale i højrisikopopulationer.Zhou et al rapporterede, at et panel af miRNA'er (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a og miR-801) kan differentiere HCC fra kronisk hepatitis B (CHB) og cirrhose sensitivitet var henholdsvis 79,1 % og 75 %, og specificitet 76,4 % og 91,1 %.80 I HBV-relateret HCC fandt vi, at miR150-niveauer var signifikant reduceret sammenlignet med dem hos kroniske HBV-patienter uden HCC (sensitivitet 79,1 %, specificitet 76,5 %).-224 var forhøjet i HCC sammenlignet med raske kontroller, og undergruppeanalyser viste højere niveauer hos patienter med HCC forbundet med HBV.hepatitis B-associeret cirrhose og HCC-patienter identificerede en siRNA-klassifikator indeholdende syv differentielt udtrykte siRNA'er, der kan påvise HCC i forskellige kontroller;AUC-intervallet ved tidlig screening er bedre end AFP-frivillige.De fandt ud af, at fire miRNA'er (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p og miR-365a-3p) kunne skelne patienter med HCC fra patienter uden HCC.Fem overudtrykkende miRNA'er (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p og miR-148a-3p) betragtes som potentielle HBV-infektioner i HCC, cirrose og CHB-biomarkører, især miR-34a-5p kan være biomarkører for levercirrhose85 og kan være potentielle biomarkører til tidlig screening af HCC i højrisikopopulationer.Det mest undersøgte lncRNA i HCC er stærkt aktiveret i leverkræft (HULC).Andre undersøgelser har vist, at HULC, der cirkulerer i HCC-patienter, kan bruges som en diagnostisk markør, fordi dette lncRNA er stærkt opreguleret hos HCC-patienter sammenlignet med raske individer.71,86 Blandt andre lnRNA'er anses LINC00152 for at være det bedste diagnostiske lncRNA på grund af dets høje AUC, sensitivitet og specificitet.86 I en undersøgelse steg perifert blodekspression af LINC00152 gradvist fra normale raske kontroller til patienter med CHB og cirrose og var endelig højest i HCC.Undersøgelser af ekspressionen af ​​circSMARCA5 i plasma fra patienter med HCC har vist et progressivt fald i ekspressionen i HCC, der spænder fra hepatitis til cirrhose og præcancerøse læsioner.87 Analyse af ROC-kurver bekræftede potentialet af disse circRNA'er til at skelne patienter med hepatitis eller levercirrhose fra dem med HCC, især dem med AFP-niveauer under 200 ng/ml.Derudover analyserede Zhu 13.617 cykliske RNA'er i plasmaprøver fra HBV-associerede HCC-patienter og bekræftede, at 6 cykliske RNA'er blev udtrykt forskelligt i HCC og HBV-associeret cirrhose, hvilket tyder på, at cRNA'er kan være gavnlige.markører for tidlig screening af højrisikogrupper såsom dem, der er forbundet med leversygdomme, sklerosepatienter.88
Exosomer er membranvesikler 40-160 nm i diameter;flere intracellulære vesikler fusionerer med cellemembranen og frigives til den ekstracellulære matrix.De indeholder mange aktive komponenter, herunder lipider, proteiner, RNA og DNA, og spiller en nøglerolle i kommunikationen mellem celler, både HCC- og ikke-HCC-celler.89,90 Exosomer regulerer progressionen af ​​HCC ved at aktivere hepatocytfibroblaster og stellatceller, immunceller, normale hepatocytter og HCC-celler.91 I tumormikromiljøet producerer tumorceller et stort antal exosomer, der transporteres fra cancerceller til umodne celler, som igen er involveret i onkogenese, nedbrydning og cellulær signalering.92 Undersøgelser har vist, at exosomer kan overføre onkogener til normale celler under patologiske processer, hvilket kan være en af ​​mekanismerne for tumorinvasion og metastase.93 Exosomers rolle i cancerprogression kan være dynamisk og specifik for cancertype, 89 Exosomer kan internaliseres af tilstødende eller fjerne celler for at regulere flere målgener i modtagerceller, der kan være involveret i intercellulære kommunikationsioner og cellulære mikromiljøinteraktioner, de kan medierer cellulær signalering og stofskifte.94 Karakteristika og dynamiske ændringer af exosomlastmolekyler afspejler direkte karakteristika og dynamiske ændringer af forældretumorceller,95 som også er grundlaget for brugen af ​​exosomer til diagnosticering og prognose af cancer, samt til forudsigelse af individuel respons på anticancerterapi ..96
Traditionelle laboratoriemetoder til isolering og analyse af exosomer er komplekse, flertrins- og tidskrævende, herunder ultracentrifugering, filtrering, størrelsesudelukkelseskromatografi, immunoaffinitetsoprensning, Western blotting, enzym-linked immunosorbent assay (ELISA), PCR og flow-analyse.miniaturiserede systemer og lab-on-a-chip platforme, der bruger mikro/nanoteknologi, udvikles bredt til hurtig, bekvem in situ isolering af exosomer.Nanopartikelsporingsanalyse (NTA) er en meget anvendt metode til at karakterisere størrelsen og koncentrationen af ​​exosomer, herunder metoder som magnetiske nanopartikler og polyhydroxyalkanoater.Mikrofluidiske og elektrokemiske metoder kan også hurtigt detektere exosomer i høje udbytter.
Eksosomale proteiner er vigtige markører for diagnosticering af HCC.I Arbelaiz-undersøgelsen var niveauet af 98 RasGAP SH3-bindende protein (G3BP) og polymer immunoglobulinreceptor (PIGR) signifikant forhøjet i HCC-afledte exosomer, og den formodede kombinerede effektivitet af de to proteiner var overlegen i forhold til AFP.Jernoverbelastning er en vigtig faktor, der bidrager til udviklingen af ​​HCC.Tseng rapporterede, at hepcidin kan spille en nøglerolle i resistens over for HCC.99 exosomer afledt af sera fra HCC-patienter havde et signifikant højere kopiantal af hepcidin-mRNA-varianter end deres raske modstykker, hvilket tyder på, at hepcidin kan være en ny diagnostisk biomarkør for HCC.14-3-3ζ-proteinet i exosomer produceret af 100 HCC kan reducere T-celleaktivering, proliferation og differentiering og kan inducere T-celletransformation til regulatoriske T-celler, hvilket resulterer i T-celleudtømning.101 Dette understøttes af adskillige undersøgelser, der undersøger tumorunddragelse fra immunovervågning, 102 som kan bidrage til HCC-tumordannelse.
Ud over tilstedeværelsen af ​​ecRNA i plasma eller serum kan RNA-berigede exosomer bruges til ikke-invasiv realtidsstadieinddeling i tidlig tumorscreening og til at bestemme tumorudvikling og respons på terapi.Niveauet af exosomal miRNA-21 i blodserum i HCC-gruppen var 2,21 gange højere end i CHB-gruppen, og i HCC-gruppen var det 5,57 gange højere end i den raske befolkning.I Wang-studiet øgede exosomer HCC signifikant sammenlignet med cirrosepatienter med AUC-værdier på 0,83 (95 % CI 0,74–0,93) og 0,94 (95 % CI 0,88–1,00).104 De opnåede data belyste involveringen af ​​specifikke exosomale lastmolekyler i reguleringen af ​​onkogenese og HCC-progression.105 Serumekspression af miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 og miR-26a er konsistent.og metastaser, og miR21-niveauer var meget højere hos HCC-patienter end hos raske kontroller og også hos CHB-patienter.102 LncRNA havde potentiel diagnostisk værdi i HCC.Undersøgelser har vist, at exosomer afledt af sera fra HCC-patienter har signifikant højere niveauer af LINC00161, LINC000635 og lncRNA aktiveret ved at transformere vækstfaktor-β end hos patienter uden HCC, og disse lncRNA'er er stærkt forbundet med TNM-stadiet og tumorvolumen.110 Conigliaro et al.CD90+ exosomer viste sig at udtrykke høje niveauer af lncRNAH19, som signifikant øgede vaskulær endothelial growth factor (VEGF) frigivelse og VEGF-R1 receptorproduktion, og derved stimulerede angiogenese.93 CircRNA'er er en anden type exosomal ncRNA - udtrykt ved lavere, men stabile niveauer på tværs af arter, viser circRNA'er også specificitet for celletype, vævstype, udviklingsstadie og regulatorisk aktivitet.111 circRNA'er er diagnostiske biomarkører for tidlig og minimalt invasiv cancer.112 Nylige kliniske forsøg har vist, at specificiteten af ​​individuelle miRNA'er til at forudsige HCC ikke er ideel.Derfor kan kompleks påvisning ved hjælp af flere assays (f.eks. miR-122 og miR-48a i kombination med AFP) forbedre identifikationen af ​​tidlig HCC og differentieringen af ​​HCC fra cirrhose.100
Patienter med CHB og levercirrhose er den mest almindelige højrisikogruppe for at udvikle HCC.For højrisikogrupper bør der, når et vedvarende virologisk respons er opnået, udvikles en omkostningseffektiv overvågningsstrategi baseret på HCC-risiko, og tidlig screening er nøglen til at forbedre diagnosen og behandlingen af ​​HCC med et højt omkostningseffektivitetsforhold2 ..Tidlige screeningsmetoder for kræft har mange begrænsninger: Der er ikke udviklet effektive tidlige screeningsmetoder for de fleste kræfttyper, og adhærensen er normalt lav.Sammenlignet med traditionelle tidlige screeningsmetoder har flydende biopsiteknologi indlysende fordele: nem prøveudtagning, panrac-detektion, god prøvereproducerbarhed og effektiv respons på tumorheterogenitet.På grund af omkostningseffektiviteten af ​​metoderne forbundet med flydende biopsi, er deres anvendelse i HCC-screening ikke blevet rutinemæssigt testet.På trods af fremskridt inden for præcis detektion på molekylært niveau er væskebiopsi dyrt at påvise HCC hos målpatienter, hvilket begrænser dens udbredte anvendelse sammenlignet med specifikke billedbehandlingsprocedurer såsom ultralyd og magnetisk resonansbilleddannelse.113.114 Imidlertid viste en tidligere undersøgelse, at flydende biopsi viste en signifikant fordel i form af kvalitetsjusterede leveår (QALYs).115 Fordelene ved flydende biopsi i tidligt karcinom i maven og nasopharynx er også blevet vist.116.117 Den nuværende opfattelse er, at flydende biopsi kan komplementere serumbiomarkører og radiologisk screening ved påvisning og diagnosticering af tumorer.117 118
Ifølge aktuel litteratur har væskebiopsiteknologi vist signifikant højere sensitivitet og specificitet ved tidlig screening af højrisikogrupper for leverkræft.Uanset typen af ​​væskebiopsi kan den skelne HCC fra højrisikopersoner uden HCC, hvilket tyder på vigtigheden af ​​tidlig screening, da forskellene mellem højrisiko- og raske individer er tydelige.ctDNA har en kort halveringstid og kan bruges til at detektere HCC, så alle ændringer i tumorafledt cDNA kan give real-time konkrete beviser for tumorprogression, især for små tumorer.Et højt niveau af ctDNA indikerer udvikling og spredning af cancer og er en tidlig indikator for progression og tilbagefald.Derudover kan patienter på baggrund af resultaterne af ctDNA få individualiseret behandling og opfølgning.119 Specifikke methyleringssteder kan være en bedre markør end AFP til tidlig identifikation af HCC og cirrose knuder.I resekterbare tilfælde af HCC er høje niveauer af cDNA tegn på mikrovaskulær invasion og postoperativt tilbagefald og metastase.Ændringer i kopiantal er forbundet med overlevelsen af ​​patienter med HCC.Det kan antages, at cDNA-evaluering kan være involveret i den samlede behandling af HCC, og cDNA kan tjene som en effektiv indikator for terapeutisk modulering.Markører baseret på specifikke genetiske mutationer i ctDNA er blevet vedtaget af kliniske retningslinjer for at forudsige effektivitet og overvåge lægemiddelresistens.ctDNA-testning kan være det mest nyttige flydende biopsiværktøj til tidlig screening.CTC'er spiller også en nøglerolle i den tidlige screening af højrisiko-HCC-grupper.Forskellige markører for HCC-associerede CTC'er er af særlig betydning ved opståen, udvikling og tilbagefald af HCC.Som membranvesikler er exosomer involveret i intercellulær kommunikation, især i HCC-celler.Cirkulerende mikroRNA'er er stabile i blodet og kan derfor være mere nyttige til tidlig screening af HCC.Gradvist blev exosomale proteiner og RNA-rige exosomer opdaget, og deres forudsigelige effektivitet for HCC blev bekræftet.Interessant nok kan forskellige ætiologier af HCC også være forbundet med forskellige mutationer, så vi kan vælge forskellige biomarkører til tidlig screening baseret på forskellige ætiologier af HCC.120
De nuværende væskebiopsiteknikker er imidlertid tvivlsomme med hensyn til stabilitet og kan ikke selvstændigt udføre tidlig screening eller monitorering af HCC, men kan stadig supplere individuel screening og diagnose.121 Som en form for væskebiopsi har påvisning og billeddannelse af ctDNA, CTC, cfRNA og exosom-associeret AFP eller PIVKA-II lovende anvendelser i den tidlige diagnose og prognose af HCC.Den nøjagtige mekanisme for ctDNA-frigivelse i blodet mangler dog at blive belyst.Afsløring af de grundlæggende biologiske egenskaber af ctDNA kan lette dets brug som markør.Den lille mængde ctDNA i cirkulationen og strenge prøvehåndteringskrav er udfordringer for den kliniske implementering af cDNA-detektion i HCC.Derudover har genetiske mutationer ikke specifikke egenskaber, der tillader nøjagtig identifikation af kræftfremkaldende stoffer.Da flere genetiske og somatiske varianter også er til stede i normalt væv, kan genetiske mutationer identificeret ved væskebiopsi være af begrænset nytte i tidlig screening for HCC.122 Begrænsningerne af veldefinerede nyttige genmål og biomarkører, der hjælper med at differentiere cDNA fra ikke-tumor-DNA, er de vigtigste spørgsmål i brugen af ​​cDNA.manglende anvendelighed af følsomme og specifikke markører til påvisning af CTC'er.Kun levedygtige celler med metastatisk potentiale blev fundet, og den optimale kombination af CSC-berigede markører var uklar.Isolering af CTC'er til dyrkning og evaluering af deres mutationsprofiler er også en udfordrende opgave.På grund af problemer med identifikation, isolering og oprensning af exosomer er den specifikke molekylære mekanisme stadig uklar, og tidligere undersøgelser af mekanismen af ​​exosomer og HCC har ikke været i dybden, og måden miRNA'er, lncRNA'er og proteiner er sorteret i exosomer , og det er ikke klart, om exosomoptagelse er en bestemt type proces.Brugen af ​​exosomer til diagnosticering og behandling af HCC er stadig på det prækliniske stadium.Manglen på standardisering af procedurer for flydende biopsi, såsom typen af ​​rør, der bruges til at indsamle blod, blodvolumen, prøveopbevaring og påvisning, isolering og berigelse, kan udelukke deres brug i rutinemæssig klinisk praksis på grund af forskelle i praksis på tværs af medicinske centre.Effektiviteten af ​​flydende biopsi i tidlig screening, diagnose, effektivitetsevaluering og forudsigelse af HCC mangler at blive udforsket, især for højrisikogrupper.Flydende biopsiteknologi har et stort potentiale og forventes at blive meget brugt i den kliniske praksis af leverkræft i den nærmeste fremtid.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimerer forekomst og dødelighed fra 36 typer kræft i 185 lande.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Hovedkvarter for den nationale sundhedskommission.Kriterier for diagnosticering og behandling af primær leverkræft (2022-udgave) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Retningslinjer for diagnosticering og behandling af hepatocellulært karcinom (2019-udgave).Leverkræft.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Retningslinjer for klinisk praksis for hepatocellulært karcinom: Japanese Society for Liver Diseases, 2017 (JSH-HCC 4. retningslinjer), 2019-opdatering.Leversygdomsreservoir.2019;49(10):1109-1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Flydende biopsi ved kronisk leversygdom.Ann Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Flydende brystkræftbiopsi: en fokuseret gennemgang.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Overvågning af hepatocellulært karcinom: nuværende bedste praksis og fremtidige retninger.Gastroenterologi.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organisation R, C Therapeutics.Kliniske retningslinjer EASL-EORTC: behandling af hepatocellulært karcinom.J Heparin.2012;56(4):908-943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Kombineret analyse af AFP og HCCR-1 som nyttige serologiske markører i små hepatocellulært karcinom: en prospektiv kohorteundersøgelse.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Differentiel ekspression af plasma-microRNA-125b i hepatitis B-virus-associeret leversygdom og diagnostisk potentiale for hepatitis B-virus-induceret hepatocellulært karcinom.Leversygdomsreservoir.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologi og betydning af alfa-føtoprotein i hepatocellulært karcinom.Lever int.2019;39(12):2214-2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Kliniske retningslinjer for behandling af hepatocellulært karcinom i Asien-Stillehavsområdet: 2017-opdatering.International Organisation for Leversygdomme.2017;11(4):317-370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Diagnostisk værdi af serum PIVKA-II alene eller i kombination med AFP hos kinesiske patienter med hepatocellulært karcinom.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Ikke-småcellet lungekræft ikke-plasma humoral væskebiopsi: tættere på tumoren!celle.2020;9(11).doi: 10.3390/celler9112486
15. Mader S, Pantel K. Flydende biopsi: nuværende status og fremtidsudsigter.Behandling Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Væskebaseret cancerbiopsi: et multimodalt diagnostisk værktøj i klinisk onkologi.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Nukleinsyrer i humant plasma.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Avanceret påvisning af cirkulerende tumor-DNA ved fragmentstørrelsesanalyse.Videnskab oversætter medicin.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Cirkulerende tumor DNA-fragmentlængde.PLOS gener.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Cirkulerende tumor-DNA: en lovende biomarkør i væskebaseret cancerbiopsi.måltumor.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Påvisning af cirkulerende tumor-DNA i tidlige og sene stadier af humane maligniteter.Videnskab oversætter medicin.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Flydende biopsi til mutationsprædiktiv analyse af solid cancer: en patologs perspektiv.J Bioteknologi.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Tidlig tumordetektion ved cirkulerende plasma-DNA-screening: hype eller håb?belgisk klinisk lov.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Virkning af hepatitisvirus og aldring på DNA-methylering i human hepatocarcinogenese.Histopatologi.2010;25(5):647-654.doi: 10.14670/HH-25.647